hplc提高分离效果的方法

 时间:2024-10-15 13:19:32

1、首先需要了解一下分离度的概念,分离度的公式如下图的公式:附上峰形图,可以更好的理解其中的表达式其中,tR1和tR2分别是峰1和峰2的保留时间;W1和W2分别是峰1和峰2在峰底(基线)的峰宽,即通过色谱峰的拐点所作三角形的底边长度。当R>1.5时,两峰可以完全分离。

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2、提高分离度,即是提高分离度公式中R的值,从公式中可以看出,可以通过提高相对保留时间以及降低峰宽来实现,当然这只是理论方案,那么实际应用中如何实现呢?

3、一、相对保留时间取决于组分及色谱柱其固有的热力学性质,两组分的保留时间差异越大,即固定相对组分的选择性越高;而两峰底宽越窄,表示柱效越高。因此选择合适的固定相非常重要,可以达到提高分离度的效果,同时选择合适的流动相及流动相比例也可以提高分离效果。

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4、二、增加柱温可以提高大多数情况下的分离效果。(注意不是所有都适用)

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5、三、可以使用离子对试剂。用于分析电离能力较强的样品,其原理是将分析物上的离子进行结合,形成在色谱柱上有保留的分子。常用的离子对试剂有:用于酸性化合物的: 四丁基氢氧化铵、四丁基溴化铵、十二烷基三甲基氯化铵用于碱性化合物的: 戊烷磺酸钠、己烷磺酸钠、庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠、癸烷磺酸钠

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