培养人胚胎干细胞时需要用到MEF来进行接种，因此在操作时必须要处理好MEF，特别是当MEF快要长满时便会出现有丝分裂，我们需要对其进行抑制因此必须使用丝裂霉素C或δ射线，具体的操作步骤如下。
1.首先用MMC来处理培养皿，接下来将培养液去除，再将其加入50ml的离心管中控制MMC的浓度在10μg/ml；
2.将每个培养皿中剩余的5买了溶液去除，在将离心管中的MMC按照15ml一个加入到培养皿中，37℃孵育3小时；
3.37℃预热MEF培养基与0.05%胰酶，在50ml离心管中加入20ml预热好的培养基；
4.在培养箱中取出3个培养皿，把上面的培养基去除再用5ml1×PBS清洗一次加入5ml胰酶；
5.待细胞飘起后吸入离心管中，用胰酶冲洗培养皿把剩余细胞冲至离心管中；
6.37℃重新预热MEF培养基最后冲洗一次加到离心管内后记录细胞数量，室温、500-600g、离心5分钟；
如果需要接种新处理的MEF按照下列步骤操作：37℃预热MEF培养基后重悬细胞，将其接种到6孔培养板中调整期密度4×106个细胞即可。
